Ciencia y Salud, Vol. V, No. 1, enero-abril, 2021 • ISSN (impreso): 2613-8816 • ISSN (en línea): 2613-8824 • Sitio web: https://revistas.intec.edu.do/

EVALUACIÓN IN VITRO DE LA ACTIVIDAD ANTIHEMOLÍTICA DE EXTRACTOS ACUOSOS (CAMELLIA SINENSIS, HIBISCUS SABDARIFFA LINN), BAJO UN DISEÑO FACTORIAL 2X5

In vitro evaluation of the anti-haemolytic activity of aqueous extracts (Camellia sinensis, Hibiscus sabdariffa Linn), under a 2x5 factorial design

DOI: https://doi.org/10.22206/cysa.2021.v5i1.pp5-10

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*Analista del Laboratorio de Metales Pesados-Solventes Orgánicos, Docente del Departamento de Ciencias Básicas-Escuela de Bioanálisis, Investigador del Laboratorio de Bioquímica Farmacológica “Dr. Francisco J. Triana Alonso” (BIOMED-UC), estado Aragua, Venezuela. ORCID: https://orcid.org/0000-0002-2765-4069 Correo-e: fpacheco2@uc.edu.ve 

**Investigadora del Laboratorio de Metales Pesados-Solventes Orgánicos, Toxicología, estado Aragua, Venezuela. ORCID: https://orcid.org/0000-0002-9333-9147 Correo-e: ibispintoc@gmail.com 

***Investigadora del Laboratorio de Metales Pesados-Solventes Orgánicos, Toxicología, estado Aragua, Venezuela. ORCID: https://orcid.org/0000-0002-4947-8027 Correo-e: doralysramirez@gmail.com 

****Investigadora del Laboratorio de Metales Pesados-Solventes Orgánicos, Toxicología, estado Aragua, Venezuela. ORCID: https://orcid.org/0000-0002-3173-1004 Correo-e: mmm1504peraza@gmail.com 

*****Investigadora del Laboratorio de Metales Pesados-Solventes Orgánicos, Toxicología, estado Aragua, Venezuela. ORCID: https://orcid.org/0000-0001-5248-9854 Correo-e: cpovo4@gmail.com 

Recibido: Aprobado:

INTEC Jurnals - Open Access

Cómo citar: Pacheco Coello F, Pinto-Catari I, Ramirez-Azuaje D, Orosco-Vargas C, Peraza-Marrero M. Evaluación in vitro de la actividad antihemolítica de extractos acuosos (Camellia sinensis, Hibiscus sabdariffa Linn), bajo un diseño factorial 2x5. cysa [Internet]. 23 de febrero de 2021 [citado 23 de febrero de 2021];5(1):5-10. Disponible en: https://revistas.intec.edu.do/index.php/cisa/article/view/2073

Resumen

Introducción: el uso y el estudio de extractos obtenidos de material vegetal se ha incrementado a nivel mundial gracias a sus diversas propiedades bilógicas, como antimicrobiana, anticancerígena, antiinflamatoria y una muy poca estudiada, la antihemolítica.

Objetivo: la investigación tuvo como propósito caracterizar y evaluar la actividad antihemolítica de dos extractos acuosos obtenidos de C. sinensis e H. sabdariffa.

Material y métodos: para la obtención de los extractos se utilizó hojas de té verde orgánico y cálices deshidratados. Posterior a esto se evaluó la actividad antihemolítica con una suspensión de glóbulos rojos colocando alícuotas de cada extracto a distintas concentraciones en presencia de peróxido de hidrógeno (H2O2). 

Resultados: se observó inhibición de la hemólisis en ambos extractos con una mayor actividad antihemolítica en el extracto de C. sinensis (p<0,05). 

Conclusiones: la concentración de compuestos bioactivos presentes en los extractos favorece y contribuye con los sistemas propios de la célula encargados de eliminar moléculas que afectan el balance redox.


Palabras clave:

hemólisis; compuestos fenólicos; Camellia sinensis; Hibiscus sabdariffa.

Abstract

Introduction: the use and study of extracts obtained from plant material has increased worldwide thanks to their various bilogical properties, such as antimicrobial, anticancer, anti-inflammatory and a very little studied anti-haemolytic.

Objective: the research was aimed at characterizing and evaluating the anti-hemolytic activity of two aqueous extracts obtained from C. sinensis and H. sabdariffa. 

Material and methods: Organic green tea leaves and dehydrated calyxes were used to obtain the extracts. After this, the anti-haemolytic activity was evaluated with a suspension of red blood cells by placing aliquots of each extract at different concentrations in the presence of hydrogen peroxide (H2O2). 

Results: inhibition of hemolysis was observed in both extracts with a higher anti-hemolytic activity in the C. sinensis extract (p<0.05).

Conclusions: the concentration of bioactive compounds present in the extracts favors and contributes to the cell’s own systems in charge of eliminating molecules that affect the redox balance.


Keywords:

Hemolysis; phenolic compounds; Camellia sinensis; Hibiscus sabdariffa.

Introducción

Las plantas con interés medicinal se han utilizado desde tiempos antiguos para el tratamiento de una diversidad de afecciones, por lo que se consideran en tiempos actuales como una alternativa real1. El cuerpo humano tiene un complejo sistema enzimático y no enzimático de defensas antioxidantes que evitan los efectos nocivos, pero muchas veces resulta insuficiente para neutralizar los radicales libres, por ello es necesario acudir a la dieta con antioxidantes de origen natural, como es el caso de algunas especies medicinales cuyos fitoconstituyentes son fuentes de antioxidantes2,3. Las potencialidades y beneficios a la salud de Camellia sinensis e Hibiscus sadbariffa, son atribuidas a los compuestos bioactivos que estas poseen (catequinas y flavonoides, antocianinas y otros) capaces de actuar en los procesos redox a nivel celular. En tal sentido, diversos estudios han demostrado que los extractos acuosos e hodroahcohólicos de C. sinensis e H. sadbariffa, poseen actividad biológica, como antimicrobiana, antiinflamatoria, anticancerígena y antioxidante, principalmente4,5,6.

Los eritrocitos son un modelo celular utilizado en investigación de daño oxidativo a nivel de las biomembranas, puesto que al ser sometidos a un estrés oxidativo, el hierro presente en la hemoglobina es liberado, pudiéndose unir a metabolitos intracelulares y componentes de la membrana7. Estos compuestos de hierro pueden reaccionar con oxígeno y generar radicales hidroxilos (OH. ) originando una peroxidación lipídica8.

Considerando el alto nivel de consumo de C sinensis e H. sabdariffa y teniendo en cuenta que el efecto citotóxico es un factor importante para el uso de los extractos naturales, se plateó como objetivo evaluar la capacidad antihemolítica de extractos obtenidos de hojas de té verde orgánico (C. sinensis) y cálices deshidratados de flor o rosa de jamaica (H. sabdariffa), representando este el primer estudio en Venezuela y en Latinoamérica que evalúa estas dos especies simultáneamente.

Material y métodos

Material vegetal

El material vegetal empleado en el estudio correspondió a hojas de té verde orgánico (procedencia China) y cálices orgánicos deshidratados de un cultivo propio de los investigadores (figuras 1A y 1B).


Obtención de los extractos acuosos

Los extractos se prepararon con 2,5 g de material vegetal y 100 mL de agua destilada. Se dejó hervir por 15 min, se separó el líquido del resto de material vegetal por decantación y la extracción se repitió en las mismas condiciones por triplicado. Los extractos se filtraron con papel Whatman No. 1 y se aforó a 200 mL con agua destilada9.

Extracción sanguínea y preparación de la suspensión de eritrocitos

Siguiendo los lineamientos de la Declaración de Helsinki y del Consejo Técnico del Centro de Estudio en Salud de los Trabajadores del Universidad de Carabobo y previo consentimiento informado, se realizó la extracción sanguínea de sangre periférica de un paciente sin patológica de base. Lo eritrocitos se obtuvieron mediante gradiente de densidades con Ficoll- Hipaque, por centrifugación a 2000 rpm, por 3 min, se tomaron con sumo cuidado. Se resuspendieron en PBS glucosado para luego ser centrifugados a 1500 rpm, por 12 minutos10.

Actividad antihemolítica en presencia de peróxido de hidrógeno (H2O2)

Un volumen de 200μL de suspensión de glóbulos rojo (2,5 x 105 eritrocitos/mL) se incubaron con 1,8 mL de extracto a las concentraciones señaladas, e incubados a 37 ºC, en agitación constante, por 325 min, en presencia de H2 O2 5 % (v/v); después de este tratamiento, se centrifugó a 8.000 rpm por 12 min y el sobrenadante fue usado para medir la hemoglobina liberada. Un blanco de 100 % de hemólisis fue usado (2,5 x 105 eritrocitos tratado con H2 O2 ). El porcentaje de liberación de hemoglobina fue determinado a una longitud de onda 540 nm empleando el equipo de absorción molecular Génesis 20 (Thermo Scintific)11,12.

Diseño experimental

Para el proceso de extracción se trabajó con un diseño estadístico factorial 2x5, considerando dos especies vegetales y cinco concentraciones (50, 100, 150, 200 y 250 µg/mL) de los extractos caracterizados correspondiente a compuestos fenólicos totales. Cada tratamiento se realizó por triplicado.

Análisis estadístico

Se aplicó un análisis de varianza de dos vías con interacción (ANOVA), usando el programa Statistix 9.0 para Windows.

Resultados

La figura 2 muestra el porcentaje de inhibición de los dos extractos evaluados en un rango de concentración de 25 a 250 µg/mL. Se observa que el extracto de C. sinensis presentó un menor % de hemolisis de los glóbulos rojos en presencia de H2 O2. Al comparar el porcentaje de inhibición el análisis de varianza arrojó significancia estadística en 200 y 250 µg/mL (p= 0,432 y p=0,465).


Discusión

Con el propósito de evaluar la actividad antihemolítica de los extractos ya mencionados, se expuso una suspensión de glóbulos rojos a una concentración de variable de cada extracto en presencia de H2 O2 como agente oxidante. En este sentido, ambos extractos presentaron actividad antihemolítica, lo cual puede estar asociado a lo descrito en diversos estudios que señalan que los compuestos fenólicos, en especial flavonoides y catequinas, juegan un papel fundamental en la eliminación de especies reactivas de oxígenos (ROS) asociados a su estructura molecular, actuando sobre enzimas como la catalasa (CAT), glutatión reductasa (GR) y la súper oxido dismutasa (SOD), manteniendo la integridad de la membrana celular (figura 3)13,14,15.


La diferencia apreciable de la actividad evaluada del extracto de C. sinencis respecto al de H. sabdariffa se debe, fundamentalmente, al mayor contenido de compuestos con actividad antioxidante como la epicatequina, galato de epicatequina, epigalocatequina y galato de epigalocatequina16.

Por otra parte, estos resultados son comparables con el hallado en extractos metanólicos de corteza de mango y guayaba, los cuales no mostraron citotoxicidad e inhibieron la hemólisis por encima del 60 % en presencia de H2 O217. Asimismo, los extractos hidroalcohólicos de café verde y tostado también han mostrado actividad antihemolítica, con la salvedad de que al ser un material vegetal que debe ser sometido a tostado, la actividad disminuye por efecto de la temperatura18. Nabavi et al. (2010)19 evaluaron la actividad antihemolítica y antioxidante de extractos hidroalcohólicos de flores, tallos y hojas de Ferula gummosa Boiss hallando una mejor actividad captadora de radicales libres quelatante y actividad antihemolítica dependiendo de la parte de la planta utilizada. Los autores concluyen entre los extractos, las flores contienen el mayor contenido de fenoles y flavonoides.

Conclusiones

La diferencia del material vegetal evaluado es un condicionante del efecto observado en este estudio. Emplear el mismo rango de compuestos fenólicos totales en ambos extractos y basados en estudios de caracterización de estas dos especies, nos permite inferir que la actividad antihemolítica evaluada, depende la presencia de moléculas capaces de reducir el estrés oxidativo.

Referencias

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